Cell Freezing Medium (1x)

Catalog Number：PZ110R

01/產品概述

細胞凍存是將細胞放在低溫環境，減少細胞代謝，以便長期儲存的一種技術，是細胞長期保存的重要手段。細胞凍存液通過冷凍保護劑在凍存過程中對細胞進行保護，以減少或防止冷凍冰晶對細胞造成的損傷。

LeapWal 無血清細胞凍存液 Cell Freezing Medium (1x) 是立譜沃生物自主研發的一款無血清、無需程序降溫的細胞凍存液，廣泛適用于多種哺乳動物細胞的凍存。該凍存液特別優化的配方含有雙重保護細胞的成份，從細胞內和細胞外同時保護細胞免受凍存時冰晶的損傷，大大提高了細胞的復蘇率和活力，可用于細胞長期保存。該產品配方成分明確，不含動物來源性蛋白，不含血清，可減少各類細菌、病毒和支原體等污染，保證凍存細胞的安全。

與傳統凍存液相比，本產品不僅可以避免使用血清，降低血清中未知成分和病毒等感染物質給凍存帶來的影響與風險，同時，可省去繁瑣費時的程序降溫過程，細胞可重懸于本產品后直接置于-80℃冰箱長期保存，或次日轉移到液氮完成整個凍存過程。

02/產品組分

03/保存條件

冰袋（wet ice）運輸。4℃保存，有效期6個月。若長期不用，可-30℃至-10℃保存，有效期24個月。

04/產品特點

1. 即用型細胞凍存液，無需程序降溫，直接凍存于-80℃冰箱，長期保存（>5年）

2. 安全性高，無動物源性蛋白，不含血清，病毒、病菌和支原體等污染可能性低

3. 凍存細胞復蘇率高達90% 以上，細胞活力好

4. 成分明確，極大降低批次間差異

05/實驗流程概要

06/實驗步驟

一：細胞凍存步驟

1. 選擇處于對數生長期的細胞，按照常規方法收集貼壁細胞或懸浮細胞于離心管中。

2. 1000 rpm-2000 rpm，離心5分鐘，收集培養細胞沉淀，棄上清液。

3. 加入適量4℃預冷的LeapWal Cell Freezing Medium (1x) 重懸細胞，制成細胞懸液。

? 按照細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存液的量，推薦凍存密度：1x10⁶至5x10⁶cells/mL。

4. 將細胞懸液分裝至已標記的凍存管中，建議每管1mL或1.5mL。

5. 直接將細胞凍存管放入-80℃超低溫冰箱中，可長期冷凍保存。如果想放入液氮中長期保存，需先放入-80℃冰箱至少12小時，方可移至液氮罐中長期保存。

二：凍存細胞復蘇步驟

1. 在15 mL離心管中加入5-10 mL平衡至室溫的*培養基。

2. 從-80℃冰箱/液氮中取出凍存的細胞，立即放入37℃水浴鍋或其他細胞復蘇設備中，迅速解凍。

3. 將凍存管中的細胞懸液逐滴轉移至預先準備好的含*培養基的離心管中，1000 rpm-1500 rpm，離心5分鐘，收集細胞沉淀，棄上清（操作時小心，切勿將細胞沉淀移去）。

4. 加入適量平衡至室溫的*培養基重懸細胞，接種到事先準備好的培養容器中，輕輕搖晃培養容器，使細胞分布均勻。

5. 鏡檢細胞后，可根據各自研究的需要和方法經行細胞常規培養。培養5-24h后，觀察細胞狀態，可視情況更換新鮮細胞培養液。

07/適用范圍

廣泛適用于多種哺乳動物細胞的凍存。無需程序降溫，-80℃可長期保存（>5年），細胞存活率在90% 以上。

08/質量控制

LeapWal 無血清細胞凍存液均已通過嚴格的內毒素、滲透壓、pH測試和無菌檢測（細菌、真菌和支原體檢測）。

09/注意事項

1. 若長期不用，本產品可-30℃至-10℃保存，再次使用時，請在2-8℃或室溫（22-25℃，不超過4小時）融化LeapWal Cell Freezing Medium，避免反復凍融；

2. 使用LeapWal Cell Freezing Medium凍存細胞后，應盡量減少凍存細胞在外存放時間，盡快移入-80℃超低溫冰箱長期保存；

3. LeapWal Cell Freezing Medium含有DMSO，部分對DMSO敏感的細胞、淋巴細胞或干細胞凍存，建議使用本產品對其進行試驗性凍存、復蘇、培養，確認性能后再進行正式凍存；

4. 該產品在室溫條件下放置的時間不宜過長，以免影響凍存效率；

5. 免責聲明: 本公司將不為任何不正當使用此產品所發生的意外負責；

6. 為了您的健康安全，請規范操作，穿戴實驗服與手套開展實驗；

7. 本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及治療。

10/實驗案例分析

1. 選擇處于對數生長期的四種細胞，按照常規方法收集細胞于離心管中。

2. 1000 rpm，離心5分鐘，收集培養細胞沉淀，棄上清液。

3. 加入適量4℃預冷的LeapWal Cell Freezing Medium 、T公司凍存液、X公司凍存液分別重懸細胞，制成細胞懸液。凍存密度為1x10⁶ cells/mL。

4. 將細胞懸液分裝至已標記的凍存管中，每管1mL，放入-80℃冰箱中，冷凍保存。

5. 凍存6個月后，進行細胞復蘇，對復蘇后的細胞進行臺盼藍染色，統計細胞存活率。

圖2: 細胞凍存6個月后復蘇，對復蘇后的細胞進行臺盼藍染色，統計細胞存活率

11/其他相關產品